Innehåll
Agarosgelelektrofores är ett vetenskapligt förfarande som används i forskning och diagnostiska projekt som innefattar studier av nukleinsyror. Det gör det möjligt för forskaren eller tekniker att separera de laddade nukleinsyramolekylerna, såsom DNA, i enlighet med deras storlek, och används för att analysera de produkter som genereras av experimentet, såsom polymeraskedjereaktionen. Det används rutinmässigt eftersom det är billigt att springa, snabb process och möjliggör att nukleinsyra analyseras.
Göra gelén
Samla alla nödvändiga föremål och rengör dem med 70% etanol. Produkterna inkluderar gelgjutningsbricka, tejp, agaros i laboratoriekvalitet, flaskor eller cylindrar, 10x-koncentration (Tris-Borate-EDTA, TBE) -dämpningsbuffert, etidiumbromid, färgämne och provet som ska analyseras. Se också till att du har en gelelektrofores reservoar och strömkälla. Agaros framställs genom att väga den lämpliga mängden DNA-tejp som ska analyseras, blanda den med TBE-bufferten och smälta i mikrovågsugnen. I allmänhet är en 1% till 2% lösning tillräcklig för att täcka många DNA-strängar som studeras i den dagliga molekylärbiologin. Små DNA kräver mer koncentrerade geler, medan större kräver mer utspädda geler. Agaroslösningen blandas med etidiumbromid, vilken kommer att binda till nukleinsyran under elektroforesproceduren. Denna lösning hälles in i smältbrickan av gelén, precis som en formkam införs och blandningen lämnas för att stelna.
Sätt in och aktivera gelén
Gelén avlägsnas från facket och nedsänktes i en gelelektroforesbehållare innehållande löpbuffert. Proverna som ska analyseras blandas med färgämnen och placeras i brunnar i gelén som skapas av kammen. En markör eller skala ingår också för att låta utredaren se framstegen av elektroforesen och bestämma storleken på de genererade fragmenten. En elektrisk ström appliceras sedan på gelén, vilket tvingar provet att migrera från ena änden av gelén till den andra. Under denna process separeras nukleinsyrorna i provet i fragment av olika storlekar, varvid större molekyler kommer närmare brunnen och mindre molekyler rör sig till den andra änden av gelén.
Analysera gelén
Efter avslutning av elektroforesproceduren avlägsnas gelén från reservoaren och placeras i en UV-transilluminator, vilken belyser nukleinsyrafragmenten som binder till fluorescerande etidiumbromid. Ett fotografi av detta är gjort och nukleinsyrans band kan mätas i enlighet med det avstånd som migrerades genom gelén. Skalan separerar dem i band av kända storlekar och kan användas för att styra forskaren under analysen.