Innehåll
Tuberkulos är en infektionssjukdom orsakad av bakterien Mycobacterium tuberculosis och är en andningssjukdom som kännetecknas av knölformationer, nekros, abscesser, fibros och förkalkning i lungorna. Det kan också infektera njurarna, lymfkörtlarna, benen, lederna och huden.
Den primära laboratoriediagnosen för denna bacillus innebär att den färgas för att visualisera bakterierna under mikroskopet. Valet av prov är sputum eller bronkoalveolär sköljning för att identifiera luftvägsinfektion eller ett prov av verklig vävnad.
Fysiologi
Mycobacterium tuberculosis är en stavformad organism (baciller), icke-mobil, icke-obligatorisk spore. Denna bakterie mäter 0,4x3 mikrometer i längd och genomgår binär fission (uppdelning av reproduktionscellen) var 15 till 24 timmar, vilket anses långsamt jämfört med andra bakterier. På grund av detta kan det ta upp till nio veckor innan mycobacterium visas i odlingsmediet.
Denna organism är känslig för UV-ljus och värme (såsom pasteurisering), men motstår kemiska desinfektionsmedel.
Gram fläck
Mycobacterium tuberculosis kan inte riktigt klassificeras som gram-positiv eller gram-negativ. Denna klassificering görs baserat på mängden peptidoglykan i cellväggen hos en bakterie. En gram-positiv art har ett tjockt lager av denna molekyl (cirka 90%), medan en gram-negativ art har ett tunt lager (från 5% till 20%). Gramfläckar tränger igenom cellväggen och binder till de kemiska komponenterna i den. Under mikroskopet blir de färgade bakterierna lila eller rosa.
Med mycobacterium tuberculosis består cellväggen av peptidoglykan, men också komplexa lipider som hämmar penetrering av gramfärgämnen. Cellväggen motstår också missfärgning med syra eller alkohol, varför mycobacterium kallas "syrabeständigt". Cellväggslipider är mykolsyra, strängfaktor och D-vax. Om bakterierna skulle färgas skulle cellerna verka grampositiva eller svagt bleka med väldigt lite färg.
För att se bakterierna måste speciella fläckar, som Aumarine eller Zhiel-Neelson-fläck, användas.
Aumarine-rodamin fläck
Processen med användning av auramin-rodamin använder ett gult fluorescerande färgämne för att visualisera mycobacterium tuberculosis under ett fluorescensmikroskop. Kaliumpermanganat eller akridinapelsin kan användas som kontrastfärg. Under linsen visas bakteriecellerna gröna.
Auramin-rodaminfärgämnet är känsligare än Zhiel-Neelson och mer ekonomiskt lönsamt.
Ziehl-Neelson färgläggning
Ziehl-Neelson-fläcken skapades av forskarna Franz Ziehl och Friedrich Neelsen och använder uppvärmd karbol-fuchsin, en hög koncentration av syraalkohol och ett kontrastfärgämne, såsom grön malakit eller metylenblått. Under ett fluorescensmikroskop visas bakteriecellerna ljusrosa.
Ziehl-Neelson-färgämnet är standard för kvalitet för den preliminära identifieringen av mycobacterium tuberculosis och mycobacterium leprae.
Agar
Sekundärt till identifieringen av mikroskopi måste mycobacterium tuberculosis odlas på en speciell agarkultur. Lowenstein-Jensen gelatin har komplexa organiska ämnen (som ägg och potatis), salter, glycerol och malakitgrönt (vilket hämmar andra bakterier). Antibiotika kan tillsättas för att ytterligare hämma förorenande mikroorganismer. Provet placeras på denna agar och bakterierna växer på tre till nio veckor.
En näringskulturlösning, såsom albumin och biotin, kan användas för att stödja tillväxten av även den minsta mängden målbakterier. Detta kallas Middlebrook 7H9 (eller 7H12).
I båda medierna kommer kolonierna att framstå som små, polerade, ljusbruna kolonier.
Med avancerad teknik kan mycobacterium tuberculosis nu odlas med hjälp av en automatiserad läsare. En flytande lösning av Middlebrook 7H9-medium och en fluorescerande indikatorförening används för att övervaka tillväxt och rapportera positiv eller negativ infektion.